Απομόνωση γενετικού υλικού και μεθυλιωτική τροποποίηση στα άρρενα γαμετικά κύτταρα
Φόρτωση...
Ημερομηνία
Συγγραφείς
Κωστούλας, Χαρίλαος Α.
Τίτλος Εφημερίδας
Περιοδικό ISSN
Τίτλος τόμου
Εκδότης
Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Επιστημών Υγείας. Τμήμα Ιατρικής
Περίληψη
Τύπος
Είδος δημοσίευσης σε συνέδριο
Είδος περιοδικού
Είδος εκπαιδευτικού υλικού
Όνομα συνεδρίου
Όνομα περιοδικού
Όνομα βιβλίου
Σειρά βιβλίου
Έκδοση βιβλίου
Συμπληρωματικός/δευτερεύων τίτλος
Περιγραφή
Τα μακρά διάσπαρτα πυρηνικά στοιχεία, LINEs, είναι τα πιο μελετημένα αυτόνομα ρετροτρανσποζόνια χωρίς LTR. Καταλαμβάνουν το 20% του γενώματος στον άνθρωπο με περίπου 700.000 αντίγραφα. Τα LINE-1 παρά το μεγάλο αριθμό αντιγράφων στο ανθρώπινο γονιδίωμα, τα πλήρους μήκους είναι περίπου 3.000 με 5.000 ενώ τα ενεργά είναι περίπου 100. Άλλη μια σημαντική κατηγορία ρετρομεθετών είναι οι ενδογενείς ρετροϊοί HERV-K10. Οι ανθρώπινοι ενδογενείς ρετροϊοί (Human endogenous retrovirus, HERV) αποτελούν τα κατάλοιπα της μόλυνσης των ανθρώπινων γαμετικών κυττάρων από εξωγενείς ρετροϊούς.
Σε έναν πολυκύτταρο οργανισμό είναι σαφές πως για την ανάπτυξή του απαραίτητες είναι και οι επιγενετικές τροποποιήσεις ορίζουν το πότε και που θα εκφραστούν τα γονίδια. Η μόνη μελετημένη επιγενετική τροποποίηση του DNA είναι η μεθυλίωση. Η μεθυλίωση του DNA στα θηλαστικά αποτελεί μια δυναμική αλλά και αυστηρά ελεγχόμενη διαδικασία, η οποία συμμετέχει σε πληθώρα κυτταρικών διεργασιών και αποτελεί ταυτόχρονα και το σημαντικότερο επιγενετικό παράγοντα στη μεταγραφική αποσιώπηση των γονιδίων (gene silencing). Η μεθυλίωση του DNA μπορεί να καταστείλει τη μεταγραφή των γονιδίων είτε άμεσα είτε έμμεσα τόσο σε επίπεδο χρωματίνης όσο και σε επίπεδο γονιδίου.
Τα μεταθετά στοιχεία των γαμετών υπόκεινται σε επαναπρογραμματισμό της DNA μεθυλίωσης τους, που συμβαίνει σε δυο στάδια. Στο πρώτο στάδιο έχουμε την απομεθυλίωση των μεταθετών στοιχείων των αρρένων γαμετικών κυττάρων και λαμβάνει χώρα κατά τη μετακίνηση των PGCs στις αρχέγονες γονάδες. Τα μεταθετά στοιχεία LINES, IAP αλλά και περιοχές μικροδορυφορικού DNA απομεθυλιώνονται σταδιακά και όχι πλήρως διατηρώντας το 16-60% της αρχικής μεθυλίωσης του DNA. Την απομεθυλίωση ακολουθεί η de novo μεθυλίωση του DNA μεταθετών στοιχείων και συμβαίνει στα μη διαιρούμενα ΕGCs στο στάδιο πριν εισέλθουν στη μείωση.
Σκοπός της παρούσας διατριβής είναι η μελέτη και η ποσοτικοποίηση του συνόλου της μεθυλίωσης και των μοτίβων μεθυλίωσης με βάση τη μεθυλιωτική κατάσταση των CpGs των ρετρομεταθετών στοιχείων LINE-1 ανάμεσα σε σπερματοζωάρια από δείγματα σπέρματος με φυσιολογικές παραμέτρους και σε σπερματοζωάρια από δείγματα σπέρματος με μη φυσιολογικές παραμέτρους. Επίσης σκοπός της διατριβής είναι η μελέτη της έκφρασης των ρετρομεταθετών στοιχείων LINE-1 και HERV-K10 στα σπερματοζωάρια.
We intend to investigate the overall methylation level and the four different patterns on methylation status of two CpGs (mCmC, mCuC, uCmC, uCuC) of LINE-1 on normozoospermic and oligospermic men. DNA methylation in mammals is a dynamic and strictly controlled process which is involved in numerous cellular processes, cell differentiation, regulation of gene expression, genome reprogramming and silencing of repetitive elements. In mammals, the epigenetic reprogramming is crucial for germ cells development. The principal epigenetic regulatory mechanism is DNA methylation and occurs in the phase of gametogenesis and upon early embryo stages. During gametogenesis there are occurred periods of DNA methylation and demethylation. There are 500.00 copies of LINE-1 in the human genome. Aberrant DNA methylation levels of LINE-1 have been implicated in various human diseases. The study consisted of 92 men. A detailed medical history was obtained from all subjects. The subjects were split into two groups: normozoospermic (70 men) and oligospermic (22 men, <20x106 spermatozoa). The oligospermic group was classified into Mid (1 man, 10-20x106 spermatozoa), Moderate (12 men, 5-10x106 spermatozoa) and Severe (9 men <5x106 spermatozoa). Semen was analyzed according to the WHO criteria. LINE-1 overall methylation level and methylation pattern of the oligospermic group were compared to the normozoospermic one. Methylation level and pattern of LINE-1 was measured via COBRA. DNA was extracted from human sperm and treated with sodium Bisulfite. DNA was amplified using primers which were designed to amplify 5΄UTR. COBRALINE-1 results were sorted into four groups according on the methylation the status of the two CpG dinucleotides from the 5΄-3΄ends of sequence: hypermethylation (mCmC), hypomethylation (uCuC), partial methylation of the 5΄(mCuC) and partial methylation of the 3΄(uCmC). Our data show a difference in the overall methylation level and different correlation in the methylation pattern on normozoospermic and oligospermic men. Our findings show that in normozoospemic samples the unmethylated sequences derived from partially methylated LINE-1s mCuC motif. Unlike, in oligospermic samples the inverse correlation indicates change of methylated LINE-1 with partially mCuC pattern. Therfore, the difference in methylation levels show different genomic allocation of LINE-1 methylation between normozoospemic and oligospermic.
We intend to investigate the overall methylation level and the four different patterns on methylation status of two CpGs (mCmC, mCuC, uCmC, uCuC) of LINE-1 on normozoospermic and oligospermic men. DNA methylation in mammals is a dynamic and strictly controlled process which is involved in numerous cellular processes, cell differentiation, regulation of gene expression, genome reprogramming and silencing of repetitive elements. In mammals, the epigenetic reprogramming is crucial for germ cells development. The principal epigenetic regulatory mechanism is DNA methylation and occurs in the phase of gametogenesis and upon early embryo stages. During gametogenesis there are occurred periods of DNA methylation and demethylation. There are 500.00 copies of LINE-1 in the human genome. Aberrant DNA methylation levels of LINE-1 have been implicated in various human diseases. The study consisted of 92 men. A detailed medical history was obtained from all subjects. The subjects were split into two groups: normozoospermic (70 men) and oligospermic (22 men, <20x106 spermatozoa). The oligospermic group was classified into Mid (1 man, 10-20x106 spermatozoa), Moderate (12 men, 5-10x106 spermatozoa) and Severe (9 men <5x106 spermatozoa). Semen was analyzed according to the WHO criteria. LINE-1 overall methylation level and methylation pattern of the oligospermic group were compared to the normozoospermic one. Methylation level and pattern of LINE-1 was measured via COBRA. DNA was extracted from human sperm and treated with sodium Bisulfite. DNA was amplified using primers which were designed to amplify 5΄UTR. COBRALINE-1 results were sorted into four groups according on the methylation the status of the two CpG dinucleotides from the 5΄-3΄ends of sequence: hypermethylation (mCmC), hypomethylation (uCuC), partial methylation of the 5΄(mCuC) and partial methylation of the 3΄(uCmC). Our data show a difference in the overall methylation level and different correlation in the methylation pattern on normozoospermic and oligospermic men. Our findings show that in normozoospemic samples the unmethylated sequences derived from partially methylated LINE-1s mCuC motif. Unlike, in oligospermic samples the inverse correlation indicates change of methylated LINE-1 with partially mCuC pattern. Therfore, the difference in methylation levels show different genomic allocation of LINE-1 methylation between normozoospemic and oligospermic.
Περιγραφή
Λέξεις-κλειδιά
Επιγενετική, Γονιδιακή αποτύπωση, Μεθυλίωση, Ρετρομεταθετά, Σπερματοζωάρια, Μοτίβα, Ρετρομετάθεση, Διαφορικά μεθυλιωμένες περιοχές, Epigenetics, Genomic imprinting, Methylation, Retroelements, Spermatozoa, Motifs, Differentially methylated regions
Θεματική κατηγορία
Σπερματοζωάρια
Παραπομπή
Σύνδεσμος
Γλώσσα
el
Εκδίδον τμήμα/τομέας
Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Επιστημών Υγείας. Τμήμα Ιατρικής
Όνομα επιβλέποντος
Γεωργίου, Ιωάννης
Εξεταστική επιτροπή
Γεωργίου, Ιωάννης
Ζηκόπουλος, Κωνσταντίνος
Μακρυδήμας, Γεώργιος
Ναυρόζογλου, Ιορδάνης
Παρασκευαΐδης, Ευάγγελος
Σοφικίτης, Νικόλαος
Μπαλτογιάννης, Δημήτριος
Ζηκόπουλος, Κωνσταντίνος
Μακρυδήμας, Γεώργιος
Ναυρόζογλου, Ιορδάνης
Παρασκευαΐδης, Ευάγγελος
Σοφικίτης, Νικόλαος
Μπαλτογιάννης, Δημήτριος
Γενική Περιγραφή / Σχόλια
Ίδρυμα και Σχολή/Τμήμα του υποβάλλοντος
Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Επιστημών Υγείας. Τμήμα Ιατρικής
Πίνακας περιεχομένων
Χορηγός
Βιβλιογραφική αναφορά
Βιβλιογραφία: σ. 133-147
Ονόματα συντελεστών
Αριθμός σελίδων
147 σ.