Μελέτη της επίδρασης του μονοπατιού Hog1 στην έκφραση γονιδίων που ρυθμίζουν την έξοδο του μύκητα Saccharomyces cerevisiae από την στατική φάση ανάπτυξης
Φόρτωση...
Ημερομηνία
Συγγραφείς
Σούρδη, Θεοδώρα
Τίτλος Εφημερίδας
Περιοδικό ISSN
Τίτλος τόμου
Εκδότης
Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Θετικών Επιστημών. Τμήμα Χημείας
Περίληψη
Τύπος
Είδος δημοσίευσης σε συνέδριο
Είδος περιοδικού
Είδος εκπαιδευτικού υλικού
Όνομα συνεδρίου
Όνομα περιοδικού
Όνομα βιβλίου
Σειρά βιβλίου
Έκδοση βιβλίου
Συμπληρωματικός/δευτερεύων τίτλος
Περιγραφή
Η είσοδος σε μια κατάσταση με αργό μεταβολικό ρυθμό είναι χαρακτηριστικό τόσο των προκαρυωτικών κυττάρων, όσο και των ευκαρυωτικών. Η κατάσταση αυτή είναι γνωστή ως στατική φάση ή ως φάση G0. Ο ζυμομύκητας Saccharomyces cerevisiae όταν εισέρχεται στην στατική φάση επιτελεί μια σειρά από κυτταρικές αλλαγές. Τα κύτταρα μειώνουν τα μεταβολικά και μεταγραφικά τους επίπεδα, έχουν μεγάλα κενοτόπια και παχιά κυτταρικά τοιχώματα, παρουσιάζουν θερμο- και οσμω- ανθεκτικότητα, σε μια τέτοια κατάσταση πραγματοποιούν την διαδικασία της αυτοφαγίας και οργανώνουν την ακτίνη του κυτταροσκελετού τους σε ειδικές δομές, τα σωμάτια ακτίνης (actin bodies). Η είσοδος στην στατική φάση συνεπάγεται και απενεργοποίηση δυο βασικών σηματοδοτικών μονοπατιών, του TOR και του RAS/PKA. Τα συγκεκριμένα μονοπάτια αντιλαμβάνονται τα επίπεδα των θρεπτικών συστατικών και είναι ενεργά όταν τα θρεπτικά συστατικά είναι άφθονα. Επιπλέον επιτηρούν στενά την έκφραση γονιδίων που εκφράζονται στη στατική φάση. Ένα ακόμη μονοπάτι που πρόσφατα ανακαλύφθηκε ότι διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στην έξοδο στη στατική φάση, είναι το HOG1. Τα κύτταρα από τα οποία απουσιάζει η κινάση Hog1, καθυστερούν να εξέλθουν από την στατική φάση, κατά την ανανέωση των θρεπτικών συστατικών. Επιπλέον, κατά την εξάντληση της γλυκόζης το Hog1 συσσωρεύεται παροδικά στον πυρήνα και ενεργοποιείται.
Σκοπός της παρούσας μελέτης είναι η αποσαφήνιση του ρόλου των μονοπατιών TOR και HOG1 στην είσοδο και έξοδο του Saccharomyces cerevisiae στην στατική φάση καθώς και στην έκφραση γονιδίων αυτής της φάσης. Χρησιμοποιώντας μια μεθοδολογία εμπλουτισμού των κυττάρων που βρίσκονται στη φάση G0 (κλασμάτωση Percoll) από καλλιέργειες μύκητα σε συνθήκες εξάντλησης των θρεπτικών συστατικών, αναλύσαμε τις μορφολογικές αλλαγές που συμβαίνουν κατά την αναστολή των μονοπατιών TOR και HOG1 κατά την είσοδο ή έξοδο από την στατική φάση. Επιπλέον σε αυτές τις συνθήκες ελέγχθηκαν τα πρότυπα έκφρασης γονιδίων, των οποίων η μεταγραφική έκφραση αυξάνεται κατά την είσοδο στην στατική φάση.
Τα αποτελέσματα που προέκυψαν από ειδικές χρώσεις του κυτταρικού τοιχώματος δηλώνουν ότι το μέγεθος του κυτταρικού τοιχώματος επηρεάζεται από την αναστολή των μονοπατιών TOR και HOG1, πιθανότατα γιατί υπάρχει αλληλεπίδραση των δυο αυτών μονοπατιών με το μονοπάτι CWI που ελέγχει την δημιουργία του κυτταρικού τοιχώματος. Ταυτόχρονες αλλαγές συμβαίνουν στον κυτταροσκελετό, καθώς η αναστολή των δυο μονοπατιών επιφέρει αλλαγές στην οργάνωση της ακτίνης κατά την είσοδο και έξοδο από την στατική φάση. Επιπλέον η διαγραφή των γονιδίων hog1 και pbs2 οδηγεί στην δημιουργία ψευδοϋφών κατά την εξάντληση των θρεπτικών συστατικών, αλλαγή που δεν αναστρέφεται με την ανανέωση τους. Τέλος η είσοδος στην στατική φάσης ακολουθείται από την αλλαγή στα μεταγραφικά επίπεδα γονιδίων, όπως τα rim15, ubi4, ste20, snz1, cln1-3 κα.
The exit of cell cycle and the entrance in a low metabolic state is a common characteristic of prokaryotic and eukaryotic cells. This state is known as quiescent state or G0 phase. In the yeast Saccharomyces cerevisiae, nutrient shortage can induce apoptosis or entry into G0 phase. Quiescent cells display distinctive characteristics, such as thickened cell walls and dense vacuoles, low metabolic rate, autophage induction, cytoskeletal changes and heat-/osmo-resistance. Importantly, the renewal of nutrients allows re-entry into the cell cycle. The entry into quiescent state leads to inactivation of TOR and Ras/PKA pathways. These pathways are active in nutrient-rich conditions but they are inhibited when cells are cultured after depletion of the growth factors. Furthermore these pathways control the gene expression of genes that are induced in quiescent state. Another pathway that plays crucial role in entrance and exit from quiescent state is the HOG1 pathway. Yeast cells with deleted Hog1, are delayed to exit from quiescence after nutrient renewal. In addition, upon glucose starvation the Hog1 protein is accumulated transiently in nucleus and is activated. Our propose is the clarification of the role of TOR and HOG1 pathways in entrance and exit from quiescent state of yeast cells and the influence on the expression of genes that are induced in quiescent state. We employed a method that separates the different cell populations of a stationary culture (percoll density-gradient centrifugation). We analyzed the morphological changes of cells due to TOR and HOG1 inactivation. Moreover in these conditions we investigated the transcriptional levels of genes which are expressed in quiescent state. Our results revealed that the thickness of the cell wall is infected when TOR and HOG1 pathway are inhibited, probably because of the crosstalk with the CWI pathway that regulates the integrity of cell wall. Moreover the inhibition of TOR and HOG1 pathway leads to actin reorganization during by the entry into G0 phase. In addition, the deletion of hog1 and pbs2 genes lead to the growth of pheudohyphae upon nutrient limitation and this observation does not change upon nutrient renewal. Finally, the entry into the quiescent state is followed by changes on transcription levels of genes, such as rim15, ubi4, ste20, snz1,cln1-3 etc.
The exit of cell cycle and the entrance in a low metabolic state is a common characteristic of prokaryotic and eukaryotic cells. This state is known as quiescent state or G0 phase. In the yeast Saccharomyces cerevisiae, nutrient shortage can induce apoptosis or entry into G0 phase. Quiescent cells display distinctive characteristics, such as thickened cell walls and dense vacuoles, low metabolic rate, autophage induction, cytoskeletal changes and heat-/osmo-resistance. Importantly, the renewal of nutrients allows re-entry into the cell cycle. The entry into quiescent state leads to inactivation of TOR and Ras/PKA pathways. These pathways are active in nutrient-rich conditions but they are inhibited when cells are cultured after depletion of the growth factors. Furthermore these pathways control the gene expression of genes that are induced in quiescent state. Another pathway that plays crucial role in entrance and exit from quiescent state is the HOG1 pathway. Yeast cells with deleted Hog1, are delayed to exit from quiescence after nutrient renewal. In addition, upon glucose starvation the Hog1 protein is accumulated transiently in nucleus and is activated. Our propose is the clarification of the role of TOR and HOG1 pathways in entrance and exit from quiescent state of yeast cells and the influence on the expression of genes that are induced in quiescent state. We employed a method that separates the different cell populations of a stationary culture (percoll density-gradient centrifugation). We analyzed the morphological changes of cells due to TOR and HOG1 inactivation. Moreover in these conditions we investigated the transcriptional levels of genes which are expressed in quiescent state. Our results revealed that the thickness of the cell wall is infected when TOR and HOG1 pathway are inhibited, probably because of the crosstalk with the CWI pathway that regulates the integrity of cell wall. Moreover the inhibition of TOR and HOG1 pathway leads to actin reorganization during by the entry into G0 phase. In addition, the deletion of hog1 and pbs2 genes lead to the growth of pheudohyphae upon nutrient limitation and this observation does not change upon nutrient renewal. Finally, the entry into the quiescent state is followed by changes on transcription levels of genes, such as rim15, ubi4, ste20, snz1,cln1-3 etc.
Περιγραφή
Λέξεις-κλειδιά
Ζυμομύκητες, Saccharomyces cerevisiae, Γονίδια
Θεματική κατηγορία
Ζυμομύκητες
Παραπομπή
Σύνδεσμος
Γλώσσα
el
Εκδίδον τμήμα/τομέας
Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Θετικών Επιστημών. Τμήμα Χημείας
Όνομα επιβλέποντος
Μιχαηλίδης, Θεολόγος
Εξεταστική επιτροπή
Μιχαηλίδης, Θεολόγος
Θυφρονίτης, Γεώργιος
Χατζηλουκάς, Ευστάθιος
Θυφρονίτης, Γεώργιος
Χατζηλουκάς, Ευστάθιος
Γενική Περιγραφή / Σχόλια
Ίδρυμα και Σχολή/Τμήμα του υποβάλλοντος
Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Θετικών Επιστημών. Τμήμα Χημείας
Πίνακας περιεχομένων
Χορηγός
Βιβλιογραφική αναφορά
Βιβλιογραφία : σ. 102-107
Ονόματα συντελεστών
Αριθμός σελίδων
107 σ.