Femtomole sequencing of proteins from polyacrylamide gels by nano-electrospray mass spectrometry
Φόρτωση...
Ημερομηνία
Συγγραφείς
Wilm, M.
Shevchenko, A.
Houthaeve, T.
Breit, S.
Schweigerer, L.
Fotsis, T.
Mann, M.
Τίτλος Εφημερίδας
Περιοδικό ISSN
Τίτλος τόμου
Εκδότης
Περίληψη
Τύπος
Είδος δημοσίευσης σε συνέδριο
Είδος περιοδικού
peer-reviewed
Είδος εκπαιδευτικού υλικού
Όνομα συνεδρίου
Όνομα περιοδικού
Nature
Όνομα βιβλίου
Σειρά βιβλίου
Έκδοση βιβλίου
Συμπληρωματικός/δευτερεύων τίτλος
Περιγραφή
Molecular analysis of complex biological structures and processes increasingly requires sensitive methods for protein sequencing. Electrospray mass spectrometry has been applied to the high-sensitivity sequencing of short peptides, but technical difficulties have prevented similar success with gel-isolated proteins. Here we report a simple and robust technique for the sequencing of proteins isolated by polyacrylamide gel electrophoresis, using nano-electrospray tandem mass spectrometry. As little as 5 ng protein starting material on Coomassie- or silver-stained gels can be sequenced. Multiple-sequence stretches of up to 16 amino acids are obtained, which identify the protein unambiguously if already present in databases or provide information to clone the corresponding gene. We have applied this method to the sequencing and cloning of a protein which inhibits the proliferation of capillary endothelial cells in vitro and thus may have potential antiangiogenic effects on solid tumours.
Περιγραφή
Λέξεις-κλειδιά
Amino Acid Sequence, Base Sequence, Cloning, Molecular, Dna, *Electrophoresis, Polyacrylamide Gel, Endothelium, Vascular/cytology/drug effects, Growth Inhibitors/chemistry/pharmacology, Humans, *Mass Spectrometry, Molecular Sequence Data, Proteins/*chemistry, RNA-Binding Proteins/chemistry, Sequence Analysis/*methods, Serum Albumin, Bovine, Tumor Cells, Cultured
Θεματική κατηγορία
Παραπομπή
Σύνδεσμος
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8559255
http://www.nature.com/nature/journal/v379/n6564/abs/379466a0.html
http://www.nature.com/nature/journal/v379/n6564/abs/379466a0.html
Γλώσσα
en
Εκδίδον τμήμα/τομέας
Όνομα επιβλέποντος
Εξεταστική επιτροπή
Γενική Περιγραφή / Σχόλια
Ίδρυμα και Σχολή/Τμήμα του υποβάλλοντος
Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Επιστημών Υγείας. Τμήμα Ιατρικής