Purification and identification of novel Rab effectors using affinity chromatography
Φόρτωση...
Ημερομηνία
Συγγραφείς
Christoforidis, S.
Zerial, M.
Τίτλος Εφημερίδας
Περιοδικό ISSN
Τίτλος τόμου
Εκδότης
Περίληψη
Τύπος
Είδος δημοσίευσης σε συνέδριο
Είδος περιοδικού
peer-reviewed
Είδος εκπαιδευτικού υλικού
Όνομα συνεδρίου
Όνομα περιοδικού
Methods
Όνομα βιβλίου
Σειρά βιβλίου
Έκδοση βιβλίου
Συμπληρωματικός/δευτερεύων τίτλος
Περιγραφή
Rab GTPases are central regulatory elements of the intracellular transport machinery of eukaryotic cells. To regulate vesicle docking and fusion as well as organelle dynamics Rab proteins interact with effector molecules in the GTP-bound active state. The identification of Rab effectors is, therefore, of primary importance for the mechanistic understanding of intracellular transport. Here we describe the experimental system we have developed to biochemically purify and identify effectors of the small GTPase Rab5. The method, which is based on an affinity chromatography procedure, results in the large-scale purification of Rab effectors in amounts sufficient for both their identification by microsequencing techniques and their functional characterization. In the case of Rab5, the procedure allows a comprehensive analysis of the downstream effectors and regulators of this GTPase. We expect this strategy to provide fundamental insights into the molecular mechanism of membrane transport but also to be applicable to several other GTPase-dependent biological functions.
Περιγραφή
Λέξεις-κλειδιά
Animals, Brain Chemistry, Cattle, Chromatography, Affinity/*methods, Guanine Nucleotide Exchange Factors/isolation & purification, Ligands, Membrane Proteins/isolation & purification, Nerve Tissue Proteins/*isolation & purification, Protein Binding, *Vesicular Transport Proteins, rab5 GTP-Binding Proteins/*metabolism
Θεματική κατηγορία
Παραπομπή
Σύνδεσμος
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10720461
http://ac.els-cdn.com/S1046202300909538/1-s2.0-S1046202300909538-main.pdf?_tid=003a168cb949c705f0caff06d21a6e64&acdnat=1333008960_fb909a4c291c42c72d202db26fd0819c
http://ac.els-cdn.com/S1046202300909538/1-s2.0-S1046202300909538-main.pdf?_tid=003a168cb949c705f0caff06d21a6e64&acdnat=1333008960_fb909a4c291c42c72d202db26fd0819c
Γλώσσα
en
Εκδίδον τμήμα/τομέας
Όνομα επιβλέποντος
Εξεταστική επιτροπή
Γενική Περιγραφή / Σχόλια
Ίδρυμα και Σχολή/Τμήμα του υποβάλλοντος
Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Επιστημών Υγείας. Τμήμα Ιατρικής