Κλωνοποίηση, υπερέκφραση και χαρακτηρισμός της 1,2- διοξυγονάσης του γεντισικού οξέος από το Pseudarthrobacter phenanthrenivorans Sphe3
| dc.contributor.author | Λάππα, Ειρήνη | el |
| dc.date.accessioned | 2019-06-26T11:30:20Z | |
| dc.date.available | 2019-06-26T11:30:20Z | |
| dc.identifier.uri | https://olympias.lib.uoi.gr/jspui/handle/123456789/29426 | |
| dc.identifier.uri | http://dx.doi.org/10.26268/heal.uoi.437 | |
| dc.rights | Default License | |
| dc.subject | Πολυκυκλικοί αρωματικοί υδρογονάνθρακες | el |
| dc.subject | Βιοαποδόμηση | el |
| dc.subject | Βακτήρια | el |
| dc.subject | Γενετικό οξύ | el |
| dc.subject | Polycyclic aromatic hydrocarbons | en |
| dc.subject | Biodegradation | en |
| dc.subject | Bacteria | en |
| dc.subject | Gentisic acid | en |
| dc.title | Κλωνοποίηση, υπερέκφραση και χαρακτηρισμός της 1,2- διοξυγονάσης του γεντισικού οξέος από το Pseudarthrobacter phenanthrenivorans Sphe3 | el |
| dc.title | Heterologous expression and characterization of 1,2-dioxigenase of gentisate from Pseudarthrobacter phenanthrenivorans Sphe3 | en |
| heal.abstract | Οι πολυκυκλικοί αρωματικοί υδρογονάνθρακες είναι μια μεγάλη ομάδα χημι-κών ουσιών με δύο ή περισσότερους αρωματικούς δακτυλίους. Οι φυσικοχημικές τους ιδιότητες έχουν επιπτώσεις τόσο στον άνθρωπο, όσο και στο περιβάλλον. Για το λόγο αυτό όλο και πιο έντονο γίνεται το ενδιαφέρον της επιστημονικής κοινότητας για τη διερεύνηση των μεθόδων αποδόμησης των ουσιών αυτών. Το βακτήριο Pseudarthrobacter phenanthrenivorans Sphe3 απομονώθηκε από μία περιοχή της Ηπείρου, που είναι μολυσμένη από το κρεόζωτο. Είναι ικανό να με-ταβολίζει τους πολυκυκλικούς αρωματικούς υδρογονάνθρακες, όπως το φαινανθρέ-νιο. Το γεντισικό οξύ αποτελεί ενδιάμεσο μεταβολίτη, κλειδί στην αερόβια βακτηρια-κή αποδόμηση αρωματικών ενώσεων. Στην παρούσα εργασία, ένα γονίδιο μήκους 1112 bp, που κωδικοποιεί την 1,2-διοξυγονάση του γεντισικού οξέος κλωνοποιήθηκε στον πλασμιδιακό φορέα pET29c και υπερεκφράστηκε στα βακτηριακά κύτταρα Escherichia coli BL21. Στη συνέχεια, πραγματοποιήθηκε καθαρισμός του ενζύμου με στήλη αγχιστείας Ni2+-NTA και με-λετήθηκαν τα βιοχημικά του χαρακτηριστικά. Η 1,2-διοξυγονάση του γεντισικού οξέ-ος ακολουθεί κινητική Michaelis-Menten. Οι τιμές Km και kcat/Km για το γεντισικό ο-ξύ είναι 24.9 μΜ και 28.75 s-1 M-1 103, αντίστοιχα. Η δραστικότητα του ενζύμου είναι βέλτιστη στους 50οC και σε εύρος τιμών pH 7.5-8. Η δραστικότητα αυξάνεται μετά από επώαση του ενζύμου σε 0.2 mM Fe2+/L-ascorbate για 30 min. H o-φαινανθρολί-νη παρουσιάζει ισχυρή ανασταλτική δράση, καθώς επίσης και τα ιόντα Cu2+, Ni2+ σε μικρότερο βαθμό. | el |
| heal.abstract | Polycyclic aromatic hydrocarbons are a large group of chemicals with two or more aromatic rings. Their physicochemical properties affect both humans and the environment. This is why the scientific community is increasingly interested in exploring the methods of degradation of these substances. The bacterium Pseudarthrobacter phenanthrenivorans Sphe3 was isolated from a region of Epirus contaminated with creosote. It is capable of degrading polycyclic aromatic hydrocarbons, such as phenanthrene. Gentisic acid is an intermediate metabolite, key in the aerobic bacterial degradation of aromatic compounds. In the present study, an 1112 bp gene encoding gentisate dioxygenase was cloned into the plasmid vector pET29c and overexpressed in Escherichia coli BL21 bacterial cells. Thereafter, the enzyme was purified by Ni2+-NTA affinity column and its biochemical characteristics were studied. Gentisate dioxoxygenase follows Michaelis-Menten kinetics. The values of Km and kcat/Km for gentisic acid are 24.9 μM and 28.75 s-1 M-1 103, respectively. The activity of the enzyme is optimal at 50°C and pH 7.5-8. The activity is increased after incubation of the enzyme in 0.2 mM Fe2+/L-ascorbate for 30 min. O-phenanthroline has a strong inhibitory effect, as well as Cu2+, Ni2+ to a lesser influence. | en |
| heal.academicPublisher | Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Επιστημών Υγείας. Τμήμα Ιατρικής | el |
| heal.academicPublisherID | uoi | |
| heal.access | free | |
| heal.advisorName | Κούκκου, Άννα-Ειρήνη | el |
| heal.bibliographicCitation | Βιβλιογραφία: σ. 100-111 | el |
| heal.classification | Υδρογονάνθρακες | el |
| heal.committeeMemberName | Κούκκου, Άννα-Ειρήνη | el |
| heal.committeeMemberName | Χατζηλουκάς, Ευστάθιος | el |
| heal.committeeMemberName | Αφένδρα, Αμαλία | el |
| heal.dateAvailable | 2019-06-26T11:31:20Z | |
| heal.fullTextAvailability | true | |
| heal.language | el | |
| heal.numberOfPages | 111 σ. | |
| heal.publicationDate | 2019 | |
| heal.recordProvider | Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Σχολή Επιστημών Υγείας. Τμήμα Ιατρικής | el |
| heal.type | masterThesis | |
| heal.type.el | Μεταπτυχιακή εργασία | el |
| heal.type.en | Master thesis | en |
Αρχεία
Πρωτότυπος φάκελος/πακέτο
1 - 1 of 1
Φόρτωση...
- Ονομα:
- Μ.Ε. ΛΑΠΠΑ ΕΙΡΗΝΗ 2019.pdf
- Μέγεθος:
- 2.41 MB
- Μορφότυπο:
- Adobe Portable Document Format
- Περιγραφή:
Φάκελος/Πακέτο αδειών
1 - 1 of 1
Φόρτωση...
- Ονομα:
- license.txt
- Μέγεθος:
- 1.71 KB
- Μορφότυπο:
- Item-specific license agreed upon to submission
- Περιγραφή: